iSR Taq DNA Polymerase

iSR Taq DNA Polymerase

 

1. 产品概述：

克隆自Thermus aquaticus，经定点突变重组的DNA聚合酶，E.coli大肠杆菌表达。 iSR Taq DNA Polymerase， 应用可逆缓释工艺（Sustained release technology，SRT）规模化生产Hotstart Taq DNA Polymerase。缓释侧链与聚合酶共价结合，形成类似脂质体结构，将Taq酶包裹，具备极高的稳定性和Hotstart 活性。

 

2、产品规格：
5000U，50KU，5U/μL（可定制）。

 

3、运输及储存：
-25℃~-15℃运输及储存。

 

4、产品型号：

1）Taq DNA 聚合酶储存缓冲液：

型号 No.		主要成份 Main component	应用场景 Applications
iT1001	普通型	20mM Tris，100mM KCl, 0.1% CA-630, 30% glycerol, 0.01% NaN3, pH=7.8～8.0	常规使用， 液体PCR试剂
iT1002	冻干型	20mM Tris，100mM KCl, 0.01%, NaN3, ProClin 300, pH=7.8～8.0	适用于冻干型PCR试剂
iT1003	烘干型	20mM Tris，100mM KCl, 0.01%, NaN3, prolin 300, 0.2% PVA, pH=7.8～8.0	适用于烘干型PCR试剂

 

 

2）10×Buffer缓冲液:

型号 No.		主要成份 Main component	应用场景 Applications
10×Buffer #1	普通型	Tris-HCl 200mM, MgCl2 25mM, KCl 750mM, NaN3 0.01%, Gelatin 0.2%, pH=8.3	常规使用，液体PCR试剂等
10×Buffer #2	普通型	Tricine 200mM, Mg(OAc)2 25mM, KOAc 750mM, NaN3 0.01%, Gelatin 0.2%, pH=8.3	常规PCR 一步法逆转录PCR
10×Buffer #3	烘干型	Tricine 200mM, Mg(OAc)2 25mM, KOAc 750mM, NaN3 0.01%, Gelatin 0.2%, PVA等 pH=8.3	常规PCR， 烘干型PCR MIX
10×Buffer #4	冻干型	Tricine 200mM, Mg(OAc)2 25mM, KOAc 750mM, NaN3 0.01%, Gelatin 0.2%, PVA及去静电剂等 pH=8.3	常规PCR， 冻干型PCR MIX等
2×Buffer #5	冻干型	甘露醇、鼠李糖、普鲁兰多糖及聚合物等	PCR MIX冻干骨架

 

 

5、 活性及纯度：

1) 活性：用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在 74℃，30 分钟内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性单位（U）；

2) 纯度：无核酸酶污染，无外切酶污染，纯度>95%。

 

 

6.   产品特色：

1) 半衰期长：缓释工艺，扩增过程有效酶活恒定不衰减。   

2）抗干扰能力强：缓释技术降低Taq酶的免疫原活性，提高了酶的抗干扰能力。

3）准确率高：降低PCR中电荷排斥，数量级提升准确性。

4）微流控最佳选择——干式PCR试剂绝佳搭档：

点胶干燥：37°C或50°C烘干，iSR Taq稳定性可达12个月；
Dispensing-drying: drying at 37°C or 50°C, stability of iSR Taq up to 12 months;

冻干干燥：iSR Taq 更宽泛冻干曲线，工艺更简单，可与多种骨架赋形剂组合，如鼠李糖、甘露醇、葡萄糖、蔗糖等等。

 

7、产品应用：

1）TaqMan PCR：具有5’～3’外切酶活性，可水解TaqMan探针。

2）TA 克隆：无Proof-reading活性（3’～5’校正活性），适用于TA 克隆。

3）多重荧光定量PCR：适用于5重以下荧光定量PCR。

4）基因突变及SNP检测：适用于等位基因或ARMS方法检测基因突变和SNP。

 

8、使用方法：

1）PCR反应液组成（50 μL）

试剂	体积
Taq DNA Polymerase (5U/μL)	0.5
10×缓冲液	5
引物1 (10 pmol)	0.5
引物 2 (10 pmol)	0.5
探针 (10 pmol)	0.5
模板	X
dATP、dUTP、dCTP、dGTP (2.5mM)	2
灭菌水	up to 50μL

 

 

2）荧光PCR反应条件：

阶段	温度（℃）	时间（秒）	循环数
1	95	60	1
2	95 55~65	5 15~60	45~50
3	37	60	1

 

 

9、注意事项：

1）使用前，请仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行实验，如需要帮助请联系技术支持。

2）该酶可能含有微量大肠杆菌基因组DNA，因此不推荐用于大肠杆菌类细菌检测。扩增大肠杆菌基因组，请选用DNA/RNA-Free Taq DNA Polymerase。

3) 若应用于一步法荧光定量PCR，请选择合适的PCR Buffer。

4) 应用该酶检测细菌和病毒时，请尽量避免引物3’-末端；引物3’-末端单碱基突变或多态性会导致出峰时间晚6～12个循环。

 

 

附件1： iSR Taq DNA Polymerase纯度及性能应用举例
Attachment 1: iSR Taq DNA Polymerase purity and performance application examples

 

★iSR Taq DNA polymerase 采用全新生产工艺，多次低温纯化，最大程度保证酶的纯度和稳定性。缓释技术修饰Taq DNA Polymerase 纯度>95%（Fig 1）。

Fig 1 Taq DNA 聚合酶修饰前，酶需要经过多次精纯化，

纯度>95%，才能进入下一步修饰工艺。

 

 

iSR Taq DNA polymerase，可以根据应用场景及DNA靶点特性，选择正电荷或中性侧链修饰Taq DNA 聚合酶，极大程度提升PCR扩增的准确性和敏感性。

经基因重组后的Taq DNA Polymerase，有2~25氨基酸可以与缓释侧链共价结合，通过优化缓释修饰工艺，控制Taq DNA Polymerase 修饰程度（Fig 2）。

 

Fig 2 PAGE胶显示，iSR Taq DNA聚合酶修饰状态。

 

 

缓释技术修饰的Taq DNA 聚合酶，当修饰>20%，Taq DNA 聚合酶则表现出完全热启动活性，如Fig 3 所示。

Fig 3 iSR Taq DNA 聚合酶热启动活性测试。

 

应用iSR Taq PCR MIX生产冻干型PCR MIX干粉：相同条件下，保存稳定性远超一般抗体和化学修饰的Taq PCR MIX干粉。

Fig 4 iSR Taq 与Q公司PCR MIX 冻干粉 50℃加速老化测试。X轴为时间（天），Y轴为循环数，“105=105 copies,102=102 copies”。iSR Taq PCR MIX冻干粉50℃加速老化，放置45天，性能基本无变化。  

 

iSR Taq 与MMLV 构建逆转录（RT）实时荧光PCR体系检测乙型流感病毒RNA。扩增性能优于Q公司 Taq-MMLV 逆转录PCR体系及C公司5G Taq。

Fig 5 iSR Taq检测乙流（IFB）扩增曲线。（A）iSR Taq（橙色） 、Q公司Taq（绿色）和C公司5G Taq（蓝色） 扩增IFB MS2 RNA模板。